DSS交联剂(不溶于水)

产品货号：

GS4316

中文名称：

DSS交联剂(不溶于水)

英文名称：

DSS crosslinkers

产品规格：

100mg|500mg

发货周期：

1～3天

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DSS是不溶于水的同型双功能的N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS-酯)，NHS-酯能够与pH7～9缓冲液中的伯氨基(-NH2)有效反应形成稳定的酰胺键，释放N-羟基琥珀酰亚胺。包括抗体在内的蛋白质通常在赖氨酸(K)残基的侧链中具有几个伯胺，并且每种多肽的N末端也可用作NHS-酯试剂的靶标。DSS是疏水性的，先溶解在有机溶剂如DMSO或DMF中，然后再加入到水溶剂反应混合物中。DSS不具有带电荷的基团，所有是亲脂性和膜可渗透的，能够用于细胞内和膜内蛋白质的共轭反应。水溶性类似物BS3具有带电荷的基团，不能渗透膜，可用于细胞表面蛋白质交联。

英文名称	Disuccinimidyl suberate
分子式	C₁₆H₂₀N₂O₈
分子量	368.35
纯度	＞95% on TLC
间隔臂	11.4Å
结构式

组分	100mg	500mg
DSS交联剂(不溶于水)	100mg	500mg
说明书	1份	1份

保存：4℃

DSS对湿度敏感。为了避免产品中的水分冷凝，开瓶前必须先平衡至室温。
NHS-酯部分易水解并无活性，因此不要制备用于储存的储备溶液，实验前配制，弃掉所有重构交联剂。
具有生物活性的交联蛋白质可能导致由分子构象变化引起的缀合时的活性损失。当交联剂修饰参与结合底物或抗原的赖氨酸基团时，也可能发生活性损失。调节试剂与目标物的摩尔比可以克服活性损失，或者使用靶向不同官能团的交联剂。
NHS酯的水解是一个竞争的反应，随pH的增加而加快。在稀释的蛋白质或肽溶液中更容易发生，浓缩的蛋白质溶液更有利于酰化反应。

一、交联蛋白的方法
以下步骤方法是该产品的示例应用，具体应用可适当优化。

所需材料：
- 无水二甲基亚砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF)，用于溶解DSS。
- 反应缓冲液：使用pH7～9的非胺类缓冲液，如20mM磷酸钠，0.15M NaCl，20mM HEPES，100mM碳酸盐/碳酸氢盐或50mM硼酸盐。
- 淬灭缓冲液：1M Tris·HCl，pH7.5(可以加入1M甘氨酸或赖氨酸)-通过透析或凝胶过滤可以去除未反应的试剂。
操作步骤：
- 用反应缓冲液配制蛋白质溶液。
- 使用前准备交联剂：用DMSO或DMF配制DSS溶液。称量2mg DSS交联剂到微量离心管中，加入溶剂216μL，最终浓度为25mM。
- 向蛋白质样品中加入交联剂，如果蛋白质浓度大于5mg/mL，则使用10倍摩尔过量的交联剂。若样品小于5mg/mL，使用20～50倍摩尔过量的交联剂。建议使用的交联剂终浓度为0.25～5mM。
- 将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。
- 加入淬灭缓冲液淬灭反应，终浓度为20~50 mMTris，或通过透析/脱盐除去未反应的试剂。
- 淬灭反应在室温下进行15分钟。

二、细胞内和细胞外交联的方法
交联反应可以在悬浮细胞或培养板中的贴壁细胞上进行。后者，交联剂向细胞的所有表面扩散会受到限制，并且交联反应将主要发生在暴露的细胞表面上。必须将细胞中的培养基洗涤干净，否则其中的含胺组分会淬灭反应。使用浓缩的细胞悬浮液是最有效的，因为反应中只需要较少的交联试剂。通常，1～5mM终浓度的交联试剂是有效的。NHS的反应速度随pH的增加而加快，因此，下述实例中pH= 8.0，反应可以快速完成。

所需材料：
- 交联剂溶液：反应前将DSS溶于无水DMSO中，10～25mM。
- 磷酸盐缓冲液(PBS)：20mM磷酸钠，0.15M NaCl，PH=8。或使用pH7～9的HEPES，碳酸氢盐/碳酸盐/硼酸盐缓冲液替代。
- 淬灭溶液：1M Tris，pH7.5(Tris或甘氨酸能够淬灭反应)
操作步骤：
- 在PBS(pH8.0)中悬浮细胞，约25×10⁶细胞/ml PBS。
- 用预冷的PBS(pH8.0)洗涤细胞三次以除去含胺的培养基和蛋白质。对于细胞表面相互作用研究，向细胞中加入配体并在4℃下孵育1小时。
- 加入DSS溶液至最终浓度为1～5mM。
- 将反应混合物在室温下孵育30分钟。
- 加入淬灭缓冲液淬灭反应，终浓度为10～20mM Tris。
- 淬灭反应在室温下进行15分钟。

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